| Forside | | Indhold | | Forrige |

Udsivning af spildevand fra afløbssystemer

Bilag C: Analysemetoder

Prøver fra pilotskala- og feltforsøg blevet analyseret for biologiske og kemiske parametre. Prøver fra forsøg A-D blev analyseret for E. coli, virus, kvælstofforbindelser (NH₄-N, NO₂-N og NO₃-N), COD og miljøfremmede stoffer. Analyseomfanget var afhængigt af det opsamlede prøvevolumen og metodernes detektionsgrænse. De ovennævnte analyser blev gennemført på Aalborg Universitet, Afdeling for Miljøteknik.

Tre prøver fra forsøg B blev analyseret for LAS og klorede opløsningsmidler. Prøverne blev taget fra søjlerne med sand I, III og IV. Desuden blev en spildevandsprøve analyseret, som blev udtaget den 2. november 2000, kl. 15. Analyserne af disse stoffer blev gennemført af laboratoriet KeMiLab.

I feltundersøgelsen blev der endvidere analyseret for bor og Clostridium perfringens og dets sporer. Analyserne blev udført hos laboratoriet Miljø-Kemi.

1.1 Biologiske analyser

De biologiske analyser omfatter måling af E. coli og colifager. Fremgangsmåden til bestemmelsen af E. coli fulgte Grant (1997): 1 ml af prøven blev opløst i ca. 50 ml fosfatbuffer (1mM) og vakuumfiltreret gennem 0,45 µm membranfiltre. Filtrene blev inkuberet med m-ColiBlueâ -mediet (Millipore), som er USEPA-godkendt. Mediet indeholder inhibitorer for at undertrykke vækst af ikke coliforme bakterier. Pladerne inkuberes ved 35°C i 24 timer. Coliforme bakterier, der ikke er E.coli bliver røde, mens E.coli kolonier farves blå. Eksempler på de inkuberede plader med E.coli-kolonier er vist på Foto C-1. Testens følsomhed bliver beskrevet med 1 CFU (100 ml)^-1.

Foto C-1:
E.coli-analyse af sand, m-ColiBlueâ -medium.

Testens resultater blev bekræftet ved hjælp af supplerende metoder (Tabel C-1). Sandmaterialerne blev analyseret for E. coli, idet 5 g af de fire sandtyper blev ekstraheret med 10 ml fosfatbuffer (1mM). 5 ml af ekstrakten blev filtreret og inkuberet på samme måde som vandprøverne. Desuden blev tre plader med et specifikt medium (Chromocult, Merck) eksponeret i målebygværket i Frejlev for at undersøge en mulig kontamination af luften med aerosoler.

Tabel C-1:
Supplerende tests til E. coli-analysen

Virusmålingerne er baseret på Sinton et al. (1996). E. coli 13706/60 bliver kultiveret i TSB-medium og tilpasset et antibiotikum (nalidixic acid, 50 mg l^-1). Kulturen kan nedfryses og tøs op til brug. Inficering af E. coli-værten med colifager fører til lyse zoner (plagues) på pladerne, som kan tælles og relateres til forekomsten af colifager. 2 ml prøve blev blandet med 200 µl af en opløsning, der indeholdet E. coli-værten og et antibiotikum i et flydende TSB-medium. Blandingen blev derefter hældt i en petri-skål, der i forvejen indeholder et lag med TSB-medium og antibiotikum. Pladerne blev inkuberet ved 35°C i 24 timer. Eftersom prøvevolumenet er fastlagt til 2 ml, ligger detektionsgrænsen i denne anvendelse på 1 PFU ml^-1.

1.2 Kemiske analyser

Bestemmelsen af kvælstofforbindelserne NO₂-N, NO₃-N og NH₄-N fulgte standardmetoderne DS 222, DS 223 og DS 224. Det udstyr, der er beskrevet i standardmetoderne, er blevet erstattet med en autoanalyser. Derudover er metoderne modificeret således, at brugen af de mest farlige stoffer undgås, f.eks. er phenol i DS 224 blevet udskiftet med den mindre giftige Na-salicylat. COD er blevet analyseret ifølge Standard Methods (APHA, 1995).

Fremgangsmåden ved analysen af phthalaterne i vandprøverne er illustreret på Figur C-1. Ca. 150 ml prøve blev opkoncentreret på en C₁₈-kolonne ved hjælp af solid phase extraction (SPE). Efter tørring af kolonnerne blev phthalaterne desorberet med 12 ml af en blanding af hexan:ethylacetat (1:1). De opkoncentrerede ekstrakter blev analyseret ved hjælp af gaskromatografi med flammeioniseringsdetektion (GC-FID).

Figur C-2:
Fremgangsmåde ved analysen af vandprøverne