| Forside | | Indhold | | Forrige |

Hurtigmetoder til screening for coliforme bakterier og E .coli i drikkevand

Bilag A

Analyseomfang

I nærværende bilag findes en detaljeret beskrivelse af fremgangsmåden ved afprøvningen:

Mellem hver testtrin er der foretaget 10 dobbeltvendinger af delprøverne (5 liters flaskerne).

Prøve 1 – 5:

Der er analyseret 5 prøver (nr. 1 – 5) – alle som dobbeltbestemmelser med nedenstående metoder.

For alle metoderne køres desuden parallelt med podning af E. coli (10 – 100 cfu pr. prøve) fra QuantiCult som enkeltbestemmelse.

Der laves således 3 "ophældninger" af hver prøve – heraf podes den ene "ophældning" med E. coli.

• 100 ml prøve fordelt i 2 x 50 ml dobbeltstyrke MacConkey-bouillon. 37 °C og 44 °C. Ophæld 12 dobbeltstyrkerør. Pod 2 rør til 37 °C og 2 rør til 44 °C med E. coli. De resterende 8 rør fordeles med 4 (= dobbeltbestemmelse af 100 ml vand) ved hver temperatur.
• 100 ml prøve i Colilert®-18, Colilert® hhv. Readycult®. Ophæld 3 flasker for hver kit, dvs. 9 flasker i alt (6 Colilert-éngangsflasker + 3 Blue-cap flasker til Readycult). Én flaske med hvert kit podes med E. coli.
• Filter/-re fra 500 ml vand i 50 ml enkeltstyrke MacConkey-bouillon. 37 °C og 44 °C. Lav 6 membranfiltreringer. Kom ét filter i hvert af 6 enkeltstyrkerør. Pod 2 af rørene med E. coli – ét til 37 °C og ét til 44 °C. Inkubér de resterende 4 rør med 2 ved hver temperatur.
• Filter/-re fra 500 ml vand i 100 ml sterilt drikkevand i de tre kommercielle systemer. Lav 9 membranfiltreringer. Kom ét filter i hver af 6 Colilert flasker med 100 ml sterilt drikkevand og ét filter i hver af 3 Blue-cap flasker med 100 ml sterilt drikkevand. Én flaske med hvert kit podes med E. coli.
• Filter/-re fra 1000 ml vand i 50 ml enkeltstyrke MacConkey-bouillon. 37 °C og 44 °C. Lav 6 membranfiltreringer. Kom ét filter i hvert af 6 enkeltstyrkerør. Pod 2 af rørene med E. coli – ét til 37 °C og ét til 44 °C. Inkubér de resterende 4 rør med 2 ved hver temperatur.
• Filter/-re fra 1000 ml vand i 100 ml sterilt drikkevand i de tre kommercielle systemer. Lav 9 membranfiltreringer. Kom ét filter i hver af 6 Colilert flasker med 100 ml sterilt drikkevand og ét filter i hver af 3 Blue-cap flasker med 100 ml sterilt drikkevand. Én flaske med hvert kit podes med E. coli.

Sterilt drikkevand anvendes som negative kontroller - enkeltbestemmelse.

Sterilt drikkevand podet med E. coli anvendes som positive kontroller - enkeltbestemmelse.

Ovenstående giver 45 bestemmelser (24 liter) pr. prøve + kontroller.

Prøve 6 – 10:

Der er analyseret 5 prøver (nr. 6 – 10) – alle som dobbeltbestemmelser med nedenstående metoder.

For alle metoderne køres desuden parallelt med podning af A. hydrophila, Klebsiella pneumoniae og Citrobacter - hver som enkeltbestemmelse.

Der laves således 5 "ophældninger" af hver – heraf podes tre "ophældninger" hver med én af de tre testorganismer.

• 100 ml prøve fordelt i 2 x 50 ml dobbeltstyrke MacConkey-bouillon. 37 °C og 44 °C. Ophæld 20 dobbeltstyrkerør. Pod 2 rør til 37 °C og 2 rør til 44 °C med enten A. hydrophila, Klebsiella pneumoniae eller Citrobacter. De resterende 8 rør fordeles med 4 (= dobbeltbestemmelse af 100 ml vand) ved hver temperatur.
• 100 ml prøve i Colilert®-18, Colilert® hhv. Readycult®. Ophæld 5 flasker for hver kit, dvs. 15 flasker i alt (10 Colilert-éngangsflasker + 5 Blue-cap flasker til Readycult). Tre flaskes med hvert kit podes med hhv. A. hydrophila, Klebsiella pneumoniae og Citrobacter.
• Filter/-re fra 1000 ml vand i 50 ml enkeltstyrke MacConkey-bouillon. 37 °C og 44 °C. Lav 10 membranfiltreringer. Kom ét filter i hvert af 10 enkeltstyrkerør. Pod 2 af rørene med A. hydrophila, 2 med Klebsiella pneumoniae og 2 med Citrobacter – ét af hver til 37 °C og ét til 44 °C. Inkubér de resterende 4 rør med 2 ved hver temperatur.
• Filter/-re fra 1000 ml vand i 100 ml sterilt drikkevand i de tre kommercielle systemer. Lav 15 membranfiltreringer. Kom ét filter i hver af 10 Colilert flasker med 100 ml sterilt drikkevand og ét filter i hver af 5 Blue-cap flasker med 100 ml sterilt drikkevand. Én flaske med hvert kit podes med A. hydrophila, ét med Klebsiella pneumoniae og ét med Citrobacter.

Sterilt drikkevand anvendes som negative kontroller i hver analysetype.

Sterilt drikkevand podet med relevant referencestamme anvendes som positive kontroller.

Ovenstående giver 50 bestemmelser (27,5 liter) pr. prøve + kontroller.

Hver af testene er inkuberet som foreskrevet i metoderne. For MacConkey dog ved 37 °C såvel som direkte ved 44 °C.

| Forside | | Indhold | | Forrige | | Top |

Version 1.0 Juli 2004, © Miljøstyrelsen.