Renere teknologi til undgåelse af biologisk vækst på murværk, tegl- og betontage

Bilag 1
Oversigt over testmetoder

Oversigt over metoder til test af kemiske midlers effekt til bekæmpelse
eller forebyggelse af biologisk vækst på murværk, tegltagsten og beton samt andre materialer

1.1 Baggrund

I kapitel 8-11 er der gjort rede for, hvilke prøvninger, der er udført i projektet. I dette bilag gennemgås en række skitser til prøvninger, som er baseret på viden hentet i litteraturen, i Miljøstyrelsens arkiv samt i Teknologisk Instituts eget arkiv. Prøvningsbeskrivelserne er ikke fyldestgørende, da informationerne i det bagvedliggende materiale har været sparsomme. Metodebeskrivelserne kan derfor ikke uden videre anvendes til prøvning, men er tænkt som et samlet idegrundlag til videre arbejde med udvikling af metoder, dokumentation af effektiviteten af midler og metoder til forebyggelse og bekæmpelse af bevoksninger på bygningsoverflader og andre udendørs eksponerede steder, hvor bevoksninger er uønskede.

De enkelte beskrivelser er forsøgt opbygget over en fællesramme med information om følgende:
Titel (kilde)
Formål
Materialer
Metode
Resultatopgørelse
Bemærkninger

1.2 Test med alger

I dette afsnit beskrives forskellige prøvninger, som kan udføres med alger. Med undtagelse af én prøvning, se 14.2.10, som udføres i drivhus, er alle prøvninger udført i laboratorium med monokultur eller blandingskultur af grønalger. Prøvningerne udføres oftest ved dyrkning af alger direkte på et fast substrat, som kan være agar, eller på et naturligt medium, som f.eks. stenmaterialer.

1.2.1 Streaked Plate technique (Drisko & Crilly, 1973 i Grant & Bravery, 1981)

Formål:

At evaluere biociders evne til at kontrollere algevækst på malingsfilm ved tilsætning af biocid direkte til dyrkningsmedium.

Materialer:

Uorganisk medium med calciumkarbonat
Calciumkarbonat
Benzalconiumclorid = BAC
9 cm Petri skåle
Kulturer af algerne Stichococcus sp. og Ankistrodesmus braunii

Metode:

BAC opløses i sterilt, deioniseret vand
Frisk autoklaveret medium tilsættes 100, 10, 5 og 1 mikrogram aktiv stof pr. ml. medium
Kontrolplader tilsættes sterilt vand
Pladerne henstår i flere dage til tør overflade
Plader inokuleres med en streg algeinokulum fra aktive kulturer på skråagar
Replika: 2
Inkuberes ved 25oC i ensartet lys ved 2,5 klux

Resultatopgørelse:

Plader evalueres med jævne mellemrum.
Allerede efter 1 dag er der synlig effekt efter 6 dage er effekten stabil.

Bemærkninger:

Stichococcus var mere sensitiv end Ankistrodesmus.
Metoden er anvendelig til screening men ikke til fastsættelse af koncentration / mængde for praktisk anvendelse.
Tilsætning af calciumcarbonat til mediet giver en hvid baggrund, som gør vurderingen lettere, og det giver et alkalisk substrat, som forhindrer skimmelvækst og simulerer et naturligt alkalisk medium.

1.2.2 Agarimprægnering (Teknologisk Institut, 1990)

Formål:

Testen demonstrerer den direkte væksthæmmende og algedræbende virkning på en kultur under optimale vækstbetingelser.

Materialer:

Petri skåle 9 cm diam.
BS-agar
Algeblandingskultur
Stichococcus bacillaris K-0150
Trebouxia sp. K-0161
Desmococcus viridis K-0092

Metode:

Petriskåle fyldes med 25 ml BS agar
Når pladerne er stivnet tilsættes middel i dosis svarende til 0,5 l/m2
Skålene henstår 7 døgn med låg på
Overfladen podes med 0,5 ml af en voksende væskekultur
Vækstens karakter bestemmes efter endt inkubation
Inkuberes ved 20oC under hvidt lys
Inkubationstid = 24 døgn

Resultatopgørelse:

Resultatet angives som størrelsen af hæmningszonen i mm/ karakter for de 5 gentagelser, efterfulgt af gennemsnit +/- standardafvigelse.

Vurderingsskala:

0 = Ingen vækst, algerne er affarvet
1 = Ingen vækst, algerne er fortsat grønne
2 = Spor af vækst, 0-10% af overfladen er dækket
3 = Svag vækst, 10-30% af overfladen er dækket
4 = Nogen vækst, 30-70% af overfladen er dækket
5 = Kraftig vækst, over 70% af overfladen er dækket

Middel

Fortynding

1

2

3

4

5

Gn.sn.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Bemærkninger:

Resultatet kan bruges som en indikation af virkningen af et produkt, hvis formål er at fjerne en algeforekomst. Midlet bør da være algedræbende og affarvende.

1.2.3 "Algal lawn technique" (Wright, 1975 i Grant & Bravery, 1981)

Formål:

At undersøge hæmning/drab af vækst på agarplade forårsaget af filterpapir med testprodukt, som placeres på agarfladen med algevækst.

Materialer:

Petri skåle 9 cm diam.
Whatman filterpapir
BAC= benzalconiumklorid
Algekultur

Metode:

A: algesuspension podes på fast medium eller
B: 19 ml autoklaveret og afkølet middel (42oC) tilsættes 1 ml algekultur, mixes og hældes op i 9 cm Petri skåle
Plader inkuberes i 7 dage i lys
BAC absorberes på 6 mm Whatman filterpapir og placeres i centrum af pladerne - 10.000, 500, 100 mikrogram aktivstof pr.filter
Inkuberes ved 25oC i ensartet lys ved 2,5 klux i 25 dage

Resultatopgørelse:

Hæmningszone måles med jævne mellemrum

B. lykkedes ikke.

A. med algen Ankistrodesmus braunii gav flot vækst, og væksthæmning kunne aflæses og udtrykkes i tabelform eller som kurve.

Bemærkninger:

Forskellige biocider har forskellig diffusionsegenskaber hvilket gør, at metoden ikke er særlig god til sammenligning af forskellige produkter, og resultatet indikerer ikke nødvendigvis hvilken koncentration, der vil virke i praksis.

1.2.4 Screening-test (Teknologisk Institut, 1981)

Formål:

At foretage en screening af aktivstoffer eller færdige midler til forebyggelse eller bekæmpelse af algevækst ved at undersøge hæmning/drab af vækst på agarplade forårsaget af filterpapir med testprodukt, som placeres på agaren med algevækst.

Materialer:

Grønalge: Stichococcus bacilaris
Petriskåle 9 cm diam.
Algemedium: Omeliansky’s medium i 1/3 styrke
(NH4)2SO4
K2HPO4
MgSO4, 7 H2O
NaCl
CaCO3
Dest. Vand
1,0 g
1,0 g
0,5 g
sporstof
2,0 g
3000,0 ml


Metode:

Mediet fyldes i Petriskåle og algekulturen spredes på mediet
Det middel, man ønsker at teste, påføres filtrerpapir i de ønskede koncentrationer. Endvidere anvendes et referencemiddel med kendt effekt samt en uimprægneret kontrol. Filtrerpapirerne skal tørre inden de lægges på pladerne. I hver skål lægges et stykke imprægneret og et stykke uimprægneret kontrolpapir
Kulturerne inkuberes ved stuetemperatur, ca. 20°C i dagslys i ca. 3 uger

Resultatopgørelse:

Effekten af midlet aflæses ved registrering af hæmningen af algevæksten på pladerne og fotoregistrering.

1.2.5 Filtrerpapir-imprægnering (Teknologisk Institut, 1990)

Formål:

At demonstrere langtidseffekten af et middel overfor en aktivt voksende algekultur i flydende stillekultur.

Materialer:

Groft filtrerpapir diam. 20 mm
Imprægneringsmiddel
Algeblandingskultur
Stichococcus bacillaris K-0150
Trebouxia sp. K-0161
Desmococcus viridis K-0092
BS flydende medie

Metode:

Cirkelskiver af grovt filtrerpapir nedsænkes 10 minutter i imprægneringsvæske
Skiverne anbringes i stinkskab til opløsningsvæsken er dampet af
Skiverne overføres til voksende væskekulturer i Petriskåle
Inkuberes ved 20oC under hvidt lys
Inkubationstid = 16 døgn
Hæmningszonens størrelse og karakter bestemmes efter endt inkubation.

Resultatopgørelse:

Resultatet angives som størrelsen af hæmningszonen i mm/ karakter for de 5 gentagelser, efterfulgt af gennemsnit +/- standardafvigelse.

Vurderingsskala:

0 = Ingen vækst, algerne er affarvet
1 = Ingen vækst, algerne er fortsat grønne
2 = Svag vækst
3 = Moderat vækst
4 = Kraftig vækst

Middel

Fortynding

1

2

3

4

5

Gn.sn.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Bemærkninger:

Testen demonstrerer midlets langtidseffekt efter påføring. Resultatet kan bruges som en indikation af virkningen af et produkt, hvis formål er at imprægnere en overflade mod algevækst. Produktet bør da være et algicid, der er modstandsdygtigt over for afdampning, udvaskning, varme, UV-lys og biologisk aktivitet.

1.2.6 Algetest – Overfladebehandling (Teknologisk Institut 1990)

Formål:

At teste et middel til forebyggelse af algevækst.

Materialer:

Glasplader
Testmiddel
BS-flydende medium
Algeblandingskultur
Stichococcus bacillaris K-0150
Trebouxia sp. K-0161
Desmococcus viridis K-0092

Metode:

Glasplader tilføres midlet i dosis svarende til 0,5 l /m2
Glassene anbringes i stinkskab til opløsningsvæsken er dampet af
Overfladen podes med alger fra en voksende væskekultur
Algerne holdes opfugtet under inkubation
Vækstens karakter bestemmes efter endt inkubation
Inkuberes ved 20oC under hvidt lys
Inkubationstid = 24 døgn

Resultatopgørelse:

Middel

Fortynding

1

2

3

4

5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Vurderingsskala:

0 = Ingen vækst, algerne er affarvet
1 = Ingen vækst, algerne er fortsat grønne
2 = Spor af vækst, 0-10% af overfladen er dækket
3 = Svag vækst, 10-30% af overfladen er dækket
4 = Nogen vækst, 30-70% af overfladen er dækket
5 = Kraftig vækst, over 70% af overfladen er dækket

1.2.7 Liquid culture toxicity test (Grant & Bravery, 1981)

Formål:

At måle effekten af biocider i flydende algekultur ved spektrofotometri

Materialer:

150 x 18 mm Pyrex testrør
8 ml Knop’s opløsning
Rør lukkes med aluminiumslåg og autoklaveres ved 1,03 bar (121oC) i 20 min
BAC i vand, 1 ml tilsættes, så der opnås 50, 10, 5 og 1 mikrogram pr. testrør
Testalger: Ankistrodesmus braunii og Selenastrum capricornutum

Metode:

1 ml algesuspension tilsættes fra aktiv cellesuspension, så der opnås en startdensitet på 1 x 105 og 1 x 106 celler pr. ml kulturopløsning
Gennemsnits absorbans måles ved start
Replika: 5
Inkuberes i 7 dage ved 25oC ved 4,5 klux

Resultatopgørelse:

Effekten af biocid måles ved måling af absorbans i spektrofotometer ved bølgelængden 441 nm.

Tab i absorbans indikerer tab af grøn pigment eller ødelæggelse af celler.

Bemærkninger:

Metoden har visse fordele i forhold til test på fast substrat f.eks. problemer med vandopløselige produkter. Algerne kan lide det våde medium. Metoden tillader sammenligning af forskellige biociders effekt, dog kan det være vanskeligt med emulgerede midler. Mangel på interaktion til substratet er en ulempe. Extrapolering til arbejdskoncentration for praktisk anvendelse er vanskelig.

1.2.8 "Vermiculite-bed technique" (Grant & Bravery, 1981)

Formål:

At simulere konstruktionsmaterialer, hvor effekten af biocid måles under kontrollerede forhold og at måle biocideffekt på en måde, hvor samspillet mellem substrat, organisme og biocid sikres.

Materialer:

Dyrkningsbeholdere: transparant plastic 220 x 110 x 80 med tætsluttende låg
100 g lufttørret vermiculit ca. 25 mm dybde
Deioniseret vand
Sten

Metode:

A. Natursten

Vermiculit opfugtes til 400% op til 450%
Vand kan tilsættes undervejs for at sikre fugtigheden
Blokke af natursten 80 x 30 x 10 mm: sandsten og limsten
Blokkene lægges på vermiculit, indstiller sig i ligevægt på 3 dage
Blokkene sprayes med Knobs opløsning med algesuspension
Inkuberes ved 25oC og 2,5 klux i 4 uger
BAC i 10.000, 5.000 og 2.500 mikrogram a.i. pr ml i deioniseret vand tilsættes med blød børste til oversiden svarende til en dækning på 200 ml pr.m2
Kontrol: deioniseret vand
Behandlede blokke inkuberes som før
Algevækst registreres efter 1 uge og herefter jævnligt med 4 ugers mellemrum
Frisk inokulum sprayes sprøjtes på for at udfordre biocidet yderligere og tillade vurdering af resteffekt.

B. Mørtel

95 x 30 x 10 mørtelbrikker produceres og neutraliseres i kuldioxid og efterfølgende udvaskning.
Samme procedure som beskrevet i test A.

Resultatopgørelse:

  1. Rekolonisering indtraf specielt efter reinokulering
  2. 4 dage efter påføring af biocid ses effekten
  3. Rekolonisering sker uden reinokulering dog ikke som kontrol

Bemærkninger:

Metoden anses for at være den bedste til at omsætte til praksis. Udvaskning og gentagen biocid behandling er mulig.

1.2.9 Metode til evaluering af stenmaterialers modstand mod algebevoksning og evaluering af kemiske inhibitorer (Grant & Bravery, 1981)

Materialer:

Blandet algekultur:
Gloeocapsa alpicola
Nostoc commune
Pleurococcus sp
Stichococcuc bacillaris
Trentepohlia aurea
Natur sten 80 x 30 x 10 mm
Mørtel 95 x 30 x 10 mm
Asbest cement 60 x 80 x 6 mm
Transparante polystyrenbokse 220 x 110 x 80 mm
100 g vermiculit opfugtet til 400%

Metode:

Inoculum pensles på over hele fladen
Inokulerede prøver inkuberes ved 18oC ved 2,5 klux i 16/8 timer dag/nat eksponering
Inkuberingstid: 4-6 uger
Testemner behandles med biocid, når de er helt overgroede med alger. Midlet påføres med blød børste
Replika: 3
Kontrol behandles med demineraliseret vand

Resultatopgørelse:

Inkuberes i 12 uger efter behandling med biocid

Efter 4 uger og 8 uger reinokuleres testemnerne med algesuspension.

Vurderingsskala:

0 = ingen vækst
1 = spor af vækst
2 = 1-10% dækning
3 = 10-30% dækning
4 = 30-70% dækning
5 = mere end 70% dækning

Suppleres med mikroskopi.

Kan viabilitet testes ved rød autofluorescens fra klorofyl.

Bemærkninger:

Metoden indikerer relativ følsomhed af forskellige materialer overfor algevækst og er derfor god til sammenlignende test af inhibitorer/biocider på forskellige substrater og relativt til hinanden og til givne reference standarder. Det skønnes at være en relativ hård test. Forsøg viser, at biocider bør testes på det relevante medium og ikke overfor kunstige medier, idet resultaterne varierer afh. af substrat.

1.2.10 Alge-test i uopvarmet drivhus (Miljøstyrelsen)

Formål:

At bestemme den phytotoxiske effekt af en række koncentrationer af salte af fede syrer på alger dyrket direkte på "containere" i uopvarmet drivhus.

Materialer:

Testemne: "Containere" til gartneri
Alger: Klebsormidium subtilissimum, Chlorococcum sp og Phoridium sp
Testmiddel
Medium: Bristols Sodium Nitrate opløsning kaldet BSNS
Uopvarmet drivhus

Metode:

Containerne skal være kraftigt angrebet af algerne
Containere angrebet af alger dyppes i testmiddel i 10 sekunder.
Replika: 3 parallelle emner
Emnerne tørres over en nat
Emnerne kultiveres i BSNS
Inkuberes i drivhus
Observationer gøres ugentlig i 4 uger
Replika: 3 parallelle testemner + 1 kontrol dyppet i vand + 1 kontrolemne dyppet i vand indstillet til samme pH som midlet for at bestemme om det er pH alene, eller om det er fede syrer, der virker

Resultatopgørelse:

Algedrab medfører brunfarvning af testemner
Algevækst hæmmet men ikke dræbt medfører, at testemner bliver vedvarende grønne.

Vurderingsskala:

++
+
-
0
vækst bedre end kontrol
lige som kontrol
mindre end kontrol
algedrab

Bemærkninger:

Alle vand og pH kontroller blev flot grønne efter 2 døgn i BSNS.

1.2.11 Algetest (Chlamydomonas sp.) i laboratorium (Miljøstyrelsen)

Formål:

At teste effekten af et biocid overfor algen Chlamydomonas sp. i flydende medium i laboratorium.

Materialer:
Kultur: Algen Chlamydomonas sp. isoleret fra styroblok plante containere
Medie: Soil Algae Agar (Poindexter 1571) og Medie IV (Proctor, 1957)
Sterilt vand
Testmiddel
Buffer: 0,5 M KH2PO4 i 32,4 ml 0,5M Na2HPO4 for hver liter til pH 8,2
Neubauer, Levy ultraplane haematocytometer grid size 1/400 sq.mm x 1/10 mm dyb

Metoder:
Algen udplades ved "streak plating" teknik
Herfra inokuleres flasker med 48 ml medie IV (Proctor, 1957) og 1 ml fedtsyre
1 cm2 algekultur skrabes af pladen og rystes i 200 ml sterilt, destilleret vand
1 ml af denne algesuspension pipetteres ned i flasken, som får et totalvolumen på 50 ml
Kontrol: flasker påføres 49 ml Medie IV + 1 ml inokulum
Medium og salt i flasker autoklaveres ved 250oF og 20 psi i 20 min.
Flaskerne stilles til afkøling
Algekultur må først tilsættes, når mediet er i ligevægt med rumtemperatur
Kulturer inkuberes i dyrkningsrum 1 uge ved 22oC og 1500 lux i 18/6 dag-nat cyclus
Buffer: 0,5 M KH2PO4 i 32,4 ml 0,5M Na2HPO4 for hver liter

Resultatopgørelse:

Antal celler pr. l bestemmes ved hjælp af Neubauer, Levy ultraplane haematocytometer grid size 1/400 sq.mm x 1/10 mm dyb, 10 grids samles pr. flaske.

1.3 Test med levermos

Levermos er en primitiv gruppe af mosser, som udgør et særligt stort problem i gartnerierne, især når det gælder potteplanter i drivhus. Levermos kan hæmme udviklingen af planterne. Vi har ikke konstateret forekomst af levermos på tage og facader. Miljøet her vil være for tørt. Levermos foretrækker et konstant fugtigt miljø. Imidlertid anvendes de kemiske rensemidler også til rensning af drivhuse og prøvninger med levermos har været forelagt som dokumentation for effektiviteten af et givet middel. Der beskrives to prøvninger med levermosset Marchantia polymorpha, den ene udføres i laboratorium og den anden i drivhus. Gemmae er levermossets formeringsorganer.

1.3.1 Levermos test i laboratorium (Miljøstyrelsen)

Formål:

At teste effekten af et biocid overfor levermos (Marchantia polymorpha)

Materialer:

Gemmae fra levermos Marchantia polymorpha

Metode:

Marchantia polymorpha gror som ukrudt i drivhuspotter, gemmae indsamles
Gemmae overfladesteriliseres i 1:50 klorin i vand i 10 minutter, renses i sterilt destilleret vand og placeres aceptisk i midten af Petriskål med soil algae agar
Kulturerne inkuberes i 30 dage ved 22oC og 1500 lux ved 18/6 dag/nat cyclus
Replica: 4
Fede syrer påføres med "asperating" sprayer i stinkskab
Inkuberes igen på samme måde

Resultatopgørelse:

Vækst og farve vurderes efter 24 timer, 48 timer, 4 dage og 7 dage.
Endelig resultatopgørelse efter 7 dage.

1.3.2 Levermos test i drivhus (Miljøstyrelsen)

Formål:

At teste effekten af et biocid overfor levermosser dyrket i uopvarmet drivhus.

Materialer:

400 stk 2" potter
UC-mix
Gemmae fra levermos Marchantia polymorpha
NPK gødning 20-20-20
Testmiddel: fede syrer
Uopvarmet drivhus

Metode:

400 stk 2" potter fyldes med UC mix og placeres i uopvarmet drivhus
Gemmae indsamles fra levermos, blandes med hanevand og vandes på potterne
Gødes 1 gang ugentlig med NPK 20-20-20 0,5 g/l
Dyrkningstid: 8 uger
Sæt af 4 potter behandles med hver sin fede syre ved hjælp af en håndsprøjte til det drypper fra potten
Kontrolsæt behandles med vand
Kontrolsæt behandles med vand, der er indstillet til samme pH som testmidlerne
Potterne stilles (inkuberes) som før og vurderes efter 24 timer, 48 timer og 1 uge

Resultatopgørelse:

Resultatet angives i procent mortalitet efter dækning af potte i forhold til, at kontrolpotter bør være 100% dækket af mos.

1.4 Test med mos

Mosser findes både i drivhuse og på tage og facader. I nogen tilfælde er der tale om store løst tilhæftede mosser, som kan fjernes manuelt. I andre tilfælde vokser mos som små lave tuer i mørtelfuger, hvor det kan være mere vanskeligt at fjerne dem manuelt. Vi har ingen solid dokumentation for, at midler, der anvendes til alger, også virker på mosser. Der kan således være god begrundelse for at udvikle prøvningsmetoder, hvor mosser anvendes som testorganisme. To prøvningsmetoder er beskrevet. Den ene udføres i uopvarmet drivhus den anden i vækstkammer ved konstant temperatur og kunstigt lys.

1.4.1 Mos-test i drivhus (Bryum capillare Hedw.) (Miljøstyrelsen)

Formål:

At teste et biocids effekt på Bryum capillare Hedw. Dyrket i drivhus.

Materialer:
400 stk 2" potter
UC-mix
Bryum capillare
NPK gødning 20-20-20
Uopvarmet drivhus

Metoder:
Arealer af sammenhængende Bryum-mos skrabes i store måtter fra et asfalt gulv
400 stk 2" potter fyldes med UC mix og placeres i uopvarmet drivhus
Mosset klippes og skæres i 2" x 2" firkanter og vandes ned i potterne.
Mosset vandes dagligt i 1 uge, gødes 1 gang med NPK 20-20-20 0,5 g/l
Sæt af 4 potter behandles med hver sin fede syre ved hjælp af en håndsprøjte, til det drypper fra potten
Mosset behandles med testmidlet
Kontrolsæt behandles med vand
Kontrolsæt behandles med vand, der er indstillet til samme pH som testmidlerne
Potterne stilles (inkuberes) som før og vurderes efter 24, 48, timer og 1 uge

Resultatopgørelse:

Resultatet angives i procent mortalitet efter dækning af potte i forhold til, at kontrolpotter bør være 100% dækket af mos.

1.4.2 Mos-test (Leptobryum pyriforme) i vækstkammer (Miljøstyrelsen)

Formål:

At teste effekten af et biocid overfor mos (Leptobryum pyriforme) dyrket i vækstkammer

Materialer:
400 stk plastikskåle
"soil algae agar" af typen Poindexter
Kultur af Leptobryum pyriforme
Vækstkammer

Metode:
Skålene fyldes med "soil algae" agar og inokuleres med mos
Skålene eksponeres ved 22oC og 1.500 lux 18/6 dag/nat cyclus
Inkuberes i ca. 4 uger, hvorefter kulturerne er udvoksede
Testmiddel påsprøjtes med håndsprøjte i stinkskab
4 parallelle
Kontrol behandlet med rent vand
Kontrol behandlet med vand indstillet til samme pH som testmidlet
Skåle inkuberes og vurderes efter 24, 48 timer, 4 dage og 1 uge

Resultatopgørelse:

Resultatet angives efter 1 uge (senere end for levermos)

Bemærkninger:

Tegn på hæmning ses allerede efter 48 timer, men hæmningen var først målbar efter 4 dage. Mosset bliver lysegrønt og brunt ved drab. Der sås ingen effekt på kontrol.