Effekt af tilsætning af Petrotech til dieselolieforurenet jord

Bilag 4 Tælling af specifikke nedbrydere i mikrotiterplader

PRINCIP:

Tælling af specifikke nedbrydere sker ved MPN-metoden (Most Probable Number) i mikrotitre plader. Ved MPN-metoden beregnes det mest sandsynlige antal af bakterier på baggrund af, hvor meget prøven skal fortyndes, før der ikke kan observeres bakterier. Tilstedeværelse af bakterier bestemmes ved bakteriernes evne til at emulgere olien.

FORSØGSPLAN:

Analyse gennemføres i triplikat.

16 g jord tilsættes 90 ml steril fortyndervand og udrystes grundigt. Det noteres hvordan udrystningen er foregået. (10^-1-fortyndingen)

1. Til hver af 6 brønde i en 4x6 mikrotitreplade tilsættes 2 ml supernatant af 10^-1-fortyndingen.
2. Fra hver brønd gennemføres en 10-foldsfortynding i fortyndervand til 10^-5 fortyndingen.
3. Hver brønd tilsættes 5 µl tung dieselolie med kanylesprøjte, så der dannes en film af olie på overfladen
4. Der lægges låg på og prøverne inkuberes ved 21 °C i 2 til 3 uger. Pladerne tilses jævnligt.
5. På en separat plade laves 2 ekstra fortyndingsrækker hvor der på forhånd er tilsat 200 µl af en 250 mg NaN₂ per 25 ml opløsning. Dette gøre ikke i triplikat, men 1 gang for hver prøve.
6. Brønde anses for positive hvis emulsifiering kan observeres som brud på oliefilmen.