Effekt af tilsætning af Petrotech til dieselolieforurenet jord

Bilag 5 Tælling af specifikke nedbrydere ved MPN

PRINCIP:

Tælling af specifikke nedbrydere sker ved MPN-metoden (Most Probable Number) i 100 ml glasflakser. Ved MPN-metoden beregnes det mest sandsynlige antal af bakterier på baggrund af, hvor meget prøven skal fortyndes, før der ikke kan observeres bakterier. Tilstedeværelse af bakterier bestemmes ved den udviklede mængde mærkede CO₂.

FORSØGSPLAN:

Analyse gennemføres med femdobbelt bestemmelse.

16 g jord tilsættes 90 ml steril fortyndervand og udrystes grundigt. Det noteres hvordan udrystningen er foregået. (10^-1-fortyndingen)

1. Der afsættes 25 µl C14-mærket hexadecanopløsning i hver flakse (25 flasker pr. prøve).
2. Efter at opløsningsmidlet er fordampet, tilsættes der autoklaveret OSM (5 flasker med 40 ml og 20 med 50 ml).
3. Fra opløsningen med 16 g jord i 90 ml vand tilsættes 10 ml til 5 flasker med 40 ml, 1 ml til 5 flasker med 50 ml og 0,1 ml til 5 flasker med 50 ml.
4. Der laves 2 fortyndinger af opløsningen med 16 g jord i 90 ml: 1/ 1 ml fra vand i 49 ml OSM og 2/ 0,1 ml 49,9 ml OSM.
5. Fra 1/ tilsættes 0,5 ml til 5 flasker med 50 ml OSM og hexadecan.
6. Fra 2/ tilsættes 0,5 ml til 5 flasker med 50 ml OSM og hexadecan.
7. I alle flasker nedføres til slut et dværgreagensglas med 1 ml 1N NaOH.
8. Inkubation sker ved 21°C (+/- 0,5°C).
9. Der udtages endvidere 3 x 25 µl af arbejdsblandingen med mærket hexadecan til bestemmelse af den tilsatte aktivitet.
10. Efter 4 ugers inkubation bestemmes aktiviteten af den udviklede kuldioxid, der er opsamlet i basen.