|
| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |
Farvestoffer i tatoveringsmærker
3 Analyse
3.1 Kemikalier og reagenser
3.2 Prøvetilberedning
3.3 Højtryksvæskekromatografi (HPLC)
3.4 Bibliotek over UV-Visible spektre reference farvestoffer
3.5 Identifikation og semi-kvantitativ bestemmlse
3.1 Kemikalier og reagenser
I alt 129 referencefarvestoffer blev anskaffet fra forskellige leverandører, som det er beskrevet i en tidligere undersøgelse (5) om indhold af farvestoffer i kosmetiske produkter. Acetonitril (ACN, Lichroslov,
for kromatografi) samt tetrabutyl-ammonium hydroxid (TBAH, 40%) er købt hos E. Merck, tetrahydrofuran (THF, HPLC grade) hos Rathburn, og citronsyre, H2O er købt hos M&B.
HPLC Buffer: I en liter målekolbe opløses 1,4 g citronsyre, 6,0 g TBAH i vand, pH indstilles til 9, 0 med ammoniak og fyldes op til mærket.
HPLC solvent: HPLC buffer/ACNl/THF (75:12,5:12,5, v/v/v)
3.2 Prøvetilberedning
Tatoveringsmærket inkl. papir afvejes i en centrifugeglas, der tilsættes 5 ml HPLC solvent, og blandingen ultralydsbehandles i 15 min. Farvestof der stadig sidder på papiret skrabes forsigtig ned i væsken.
Papiret fjernes og tørres natten over ved stuetemperatur, hvorefter det afvejes. Ekstraktet filtreres gennem Whatman No. 2 filtrerpapir og analyseres ved HPLC. Filtrerpapiret med uopløst farvet materiale
tilsættes 2 ml THF, og opløsningen filtreres gennem Whatman No. 2 filtrerpapir og analyseres ved HPLC.
3.3 Højtryksvæskekromatografi (HPLC)
Der udføres dobbeltanalyser på alle prøveekstrakter og kalibreringsopløsninger af standardstoffer ved HPLC som følger:
Apparatur
| Pumpe |
Gradient pumpe (Waters 616 pumpe med 600 controller) |
| Autosampler |
Autosampler/Visp (Waters 717) |
| Detektor |
PDA detektor (Waters 996) |
| PC-styring |
PC-styring af HPLC system (Waters EMPOWER) |
| HPLC kolonne |
Forekolonne PLRP-S Guard cartridge, 5 mm x 3 mm og analytisk kolonne PLRP-S 100 Å, 5 µm, 150 mm x 4,6 mm fra Polymer laboratories. |
| Kolonne temperatur |
25°C |
HPLC analyse
| Kørsel |
Gradient |
| Flow |
0,8 ml/min |
| Eluenter |
Som i tabel nedenfor |
| Injektions volumen |
20 µl |
| Kørselstid |
35 min |
| Dataindsamling |
Området 275 nm-760 nm, 1 spektrum/s, resolution 4,8 nm |
Gradientprogram
| Tid |
Flow
ml/min |
% HPLC buffer |
% ACN |
% THF |
Kurve |
| 0 |
0,8 |
75 |
12 |
13 |
|
| 2,5 |
0,8 |
75 |
12 |
13 |
|
| 25 |
0,8 |
5,0 |
47 |
48 |
Lineær |
| 30 |
0,8 |
5,0 |
47 |
48 |
|
| 35 |
0,8 |
75 |
12 |
13 |
Lineær |
3.4 Bibliotek over UV-Visible spektre reference farvestoffer
HPLC analyse af alle reference farvestoffer opløst i egnede solventer (5) er udført som beskrevet ovenfor. Kromatografiske data for hvert stof behandles med EMPOWER software for at generere et
”maxplot” kromatogram, hvor alle stoffer, der elueres gennem HPLC kolonnen, viser en kromatografisk top ved disses respektive λmax.
3.5 Identifikation og semi-kvantitativ bestemmlse
Ud fra kromatografiske data for hvert prøveekstrakt laves et maxplot kromatogram. Identifikation af farvestoffer i prøveekstrakterne udføres ved at sammenholde retentionstider og spektra af disse HPLC
toppe med retentionstider og spektra af reference farvestoffer, analyseret under samme betingelser som prøverne (5).
Indholdet af de identificerede stoffer bestemmes med anvendelse et punkts kalibrerings for hvert stof. Koncentrationer for enkelte stoffer anvendt til kalibrering varierede 0,5 – 3,0 ppm afhængig af
kromatografisk respons af stofferne.
| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste | | Top |
Version 1.0 August 2005, © Miljøstyrelsen.
|