Planteoptag af miljøfremmede, organiske stoffer fra slam  

11. Bilag 3

Metoder anvendt på RISØ.

Vandholdende evne, WHC
Jordens vandholdende evne er bestemt ved tragtmetoden (modificeret efter Peters, 1965). I en Büchnertragt afvejes 100 g lufttørret jord som langsomt mættes med vand. Tragten tildækkes med perforeret parafilm og jorden afdræner i 24 timer. Herefter bestemmes jordens vandindhold gravimetrisk (tørring 24 timer ved 105 ° C). For jordprøver udtaget i 1996 benyttedes afvejning af 1 til 1,5 kg tør jord i plastbeholder med perforering i bunden, men ellers tilsvarende fremgangsmåde.

Bladareal
Bladareal er beregnet efter lineær optisk skanning af grønne dele (byg) eller separat af blad og stængel (gulerodstop) ved brug af areal måler (Delta-T Devices Ltd., Cambridge, England) (Jensen, 1987). Der er målt bladareal for 6 bygplanter fra hver dosering og for én gulerod fra to kar fra hver dosering. Udfra påvist lineær sammenhæng imellem våd vægt af gulerodstop og målt bladareal er det totale bladareal i hvert kar efterfølgende beregnet udfra den totale våd vægt af gulerodstop i karret.

Biovolumen
Biovolumen blev bestemt ved at måle den fortrængte mængde vand efter separat nedsænkning af blad, stængel og rod i 50 ml vand (byg) eller 70% (V/V) ethanol i vand (gulerødder) i 100 ml måleglas. Til bestemmelserne blev der medtaget målinger på 6 bygplanter samlet fra hver dosering og på en gulerodsplante fra to kar fra hver dosering. Densiteten er for byg og gulerodstop beregnet udfra målt biovolumen og vægt for de udtagne planter, mens densiteten for gulerødder er beregnet udfra målt biovolumen og anslået vægt baseret på røddernes gennemsnitlige diameter, længde og vægt.

Tørstof og glødetab
Der bestemt tørstof og glødetab af plante- og jordprøver efter Dansk Standard, DS 204.

Total lipid
Total lipidindhold blev bestemt ved ekstraktion med chloroform/methanol, 2:1, vask af ektraktet for salte med vand og inddampning med gravimetrisk bestemmelse af total lipid (Christie 1982, Evans et al, 1991 og Folch et al 1957).

Ulejret tør-rumvægt
Ulejret tør-rumvægt (massefylde) af jord er bestemt efter Plantedirektoratets fælles arbejdsmetoder for jordbundsanalyser (1994).

Syrekapacitet
Syrekapacitet (pH i vandig opslemning) af jord er bestemt efter Plantedirektoratets fælles arbejdsmetoder for jordbundsanalyser (1994).

Bestemmelse af LAS i plantemateriale, jord og slam
Plantematerialet frysetørres og formales, C₈-LAS tilsættes som intern kontrol, og materialet ekstraheres ad flere omgange i Soxhlet udstyr i specialrenset ekstraktionshylster. Ekstraktet oprenses på anionbytter- og reverse-phasekolonner. Det samlede, oprensede ekstrakt inddampes under ren kvælstof og HPLC-analyseres ved gradienteluering med acetonitril/vand og fluorescensdetektion.

Summen af hver af isomérblandingerne med kædelængde C₁₀, C₁₁, C₁₂ og C₁₃ kvantificeres og retentionstiden fastlægges udfra en kommercielt tilgængelig blanding af LAS med forskellig kædelængde (Marlon A). Resultaterne opgives som total LAS, svarende til summen af de 4 isomérblandinger (homologe).

Prøver af jord og slam analyseres tilsvarende, men ved høje koncentrationer oparbejdes kun en mindre del af ekstrakterne til analyse.

Bestemmelse af DEHP i plantemateriale, jord og slam
Plantemateriale klippes i stykker, tilsættes renset, vandfrit natriumsulfat og extraheres med en Ultra-Turrax homogenisator i hexan/acetone. Extraktet inddampes og oprenses på en aluminiumoxid kolonne. Det oprensede extrakt opkoncentreres ved delvis inddampning under ren kvælstof og analyseres med GC/MS/MS (ion 121+65 kvantificeres). Med henblik på at forhindre forurening af ekstrakterne under inddampning er til formålet bygget et aflukket inddampningskammer.

Prøver af jord og slam analyseres tilsvarende, men der foretages ikke oprensning af ekstrakterne på kolonner inden analyse. Jord og slam frysetørres, neddeles og homogeniseres inden analyse.

Referencer
Christie, W.W., 1982. Lipid Analysis. 2^nd Ed., Pergamon, Oxford.

Dansk Standard (1991) Standarder for Vand & Miljø. Fysiske og kemiske metoder, Bind 1. Dansk Stardardiseringsråd.

Evans, D.E., P.E. Taylor, M.B. Singh & R.B. Knox, 1991. Quantitative Analysis of Lipids and Protein from the Pollen of Brassica napus L.. Plant Sci., 73: 117-126.

Jensen, E.S. 1987. Seasonal patterns of growth and nitrogen fixation in field grown pea. Plant and Soil 101, 29-37

Folch, J., M. Lees & G.H.S. Stanley, 1957. A Simple Method for the Isolation and Purification of Total Lipids from Animal Tissues. J. Biol. Chem., 226: 497-509.

Peters, D.B. 1965. Water availability. In: (C.A. Black, D.D. Evans, J.L. White, L.E. Ensminger, and F.E. Clark eds.) Methods of Soil Analysis - Part 1. Physical and Mineralogical Properties, Including Statistics of Measurements and Sampling. Agronomy no. 9, American Society of Agronomy, Madison. pp 279-285.

Plantedirektoratet, 1994. Fælles arbejdsmetoder for jordbundsanalyser. Landbrugsministeriet, Plantedirektoratet.