| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |
Afgivelse af organisk stof fra polymere materialer - mikrobiel vækst
Alle levende celler indeholder adenosine triphosphate (ATP), som spiller en vigtig
rolle i cellernes enzymaktivitet og energilagring. ATP-niveauet i cellerne er nøje
reguleret, og kan derved anvendes som et mål for cellekoncentrationen i en given vandig
prøve. ATP-koncentrationen bestemmes udfra en enzymatisk reaktion katalyseret af
luciferase1:
Den resulterende lysudsendelse er direkte proportionel med ATP-koncentrationen.
Lysudsendelsen detekteres vha. en photomultiplier, der angiver lysmængden i 'relative
light units' (rlu).
Før en prøve måles, tilsættes denne et reagens, der frigiver intercelluar ATP til
vandfasen. Prøven tilsættes herefter en enzymopløsning indeholdende luciferin og
luciferase, og lysudsendelsen måles.
Da den enkelte prøves karakter (farve, tubiditet, pH osv.) kan påvirke enzymets
aktivitet (og dermed den optimale lysudsendelsen), måles der for hver prøve endvidere en
intern standard, hvormed målingen af prøven kan korrigeres.
Den korrigerede rlu-værdi omsættes vha. standardkurve til en ATP-koncentration, der
generelt opgives i pg ATP/ml.
I dette projekt blev måling af ATP foretaget med indstillingerne:
T = 25° C
10 s ekstraktionstid
10 s integrationstid efter 2 s delay
Prøver til ATP-måling udtages i ATP-fri eppendorf-rør, og opbevares indtil måling
ved -80° C.
Prøver fra serie 1 og 2 (Kapitel 8) blev målt på Biocounter Model 2010 fra Lumac,
med reagens-kit NRB/LUMIT-PM fra Celsis.
Prøver fra serie 3 (Kapitel 8) blev målt på Biocounter Model Advance Coupe fra
Celsis med reagens-kit PCP fra Celsis.
Prøver fra desinfektionsundersøgelsen i Bilag G blev målt på Biocounter Model
Advance Coupe fra Celsis med reagens-kit NRB/LUMIT-PM fra Celsis.