| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |

Undersøgelse for Legionella i drikkevand

Bilag E

Screening af afgangsvand, flowskema

Flowskema og beskrivelse af modificeret DS 3029


  Med det samme		  
  Rystebord, 1 t, IIa   I
  ↓  
  Udså 0,1 ml på GVPC og MWY  
  ↓  
  3 x 2,0 ml af IIa i eppendorfrør   II
  ↓  
  Centrifugeres  
  ↓  
  Fjern 1,7 ml fra rør 1
  Fjern 1,7 ml fra rør 2
  Fjern 1,8 ml fra rør 3		  
  ↓  
  Whirlmix og udså 0,1 ml på GVPC og MWY fra rør 1  
  ↓  
  Rør 2 sættes i vandbad
  50°C, 30 min →		   Udså 0,1 ml på GVPC og MWY
  IV
  ↓  
  Rør 3 tilsættes 1,8 ml syrebuffer  
  ↓  
  Henstår 5 min  
  ↓  
  Whirlmix og udså 0,1 ml på GVPC og MWY
 		   III

Alle plader inkuberes og aflæses som flg.:

INKUBERING
37,0 ± 1,0°C i lukkede plastposer.

AFLÆSNING
Aflæs efter ca. 4 og ca. 7 dage. Slutaflæs efter 10 dage.
Typiske kolonier er konvekse, helrandede, glinsende med kornet overflade (”Knust glas”) – se evt. under stereomikroskop. Grå, hvide, blå-violette eller lime-grønne. Nogle kan fluorescere. Kolonierne er små (pin-point) efter 2 – 3 dage, men vokser derefter til ca. 3 – 4 mm. Ved mikroskopi ses tynde, slanke stave op til filamentøse.

VERIFIKATION
Indgik ikke, da der ikke var fund af suspekte Legionella.

Fire trin indgår i analysen af vandprøver

  • I. Membranfiltrering (1. opkoncentrering): 10 l filtreres på vandværket og filter overføres til bluecapflaske med 20 ml sterilt ledningsvand. Flasken rystes på rystebord ved 200 rpm i 60 ± 5 minutter. Herved koncentreres prøven 500 X. 0,1 ml udsås på overfladen af GVPC og MWY agar.
     
  • II. Centrifugering (2. opkoncentrering): 2 ml af den opkoncentrerede prøve (I) afpipetteres i et sterilt Eppendorfrør, der centrifugeres ved 8000 g i 5 ± 0,5 minutter. Efter centrifugering afpipetteres (fjernes) 1,7 ml supernatant. Herved opkoncentreres prøven yderligere 6,7 X. Den resterende prøvemængde (0,3 ml) rystes på whirlmixer. 0,1 ml udsås på overfladen af GVPC og MWY agar.
     
  • III. Syrebehandling: 2 ml af den opkoncentrerede prøve (I) afpipetteres i et sterilt Eppendorfrør, der centrifugeres ved 8000 g i 5 ± 0,5 minutter. Efter centrifugering afpipetteres (fjernes) 1,8 ml supernatant. Herved opkoncentreres prøven yderligere 10 X. Den resterende prøvemængde (0,2 ml) rystes på whirlmixer. Til de 0,2 ml tilsættes 1,8 ml syrebuffer pH 2,2. Herved fortyndes prøven 10 X. Henstand ved stuetemperatur i 5 ± 0,5 minutter. 0,1 ml udsås på overfladen af GVPC og MWY agar.
     
  • IV. Varmebehandling: 2 ml af den opkoncentrerede prøve (I) afpipetteres i et sterilt Eppendorfrør, der centrifugeres ved 8000 g i 5 ± 0,5 minutter. Efter centrifugering afpipetteres (fjernes) 1,7 ml supernatant. Herved opkoncentreres prøven yderligere 6,7 X. Den resterende prøvemængde (0,3 ml) rystes på whirlmixer. Røret sættes i vandbad ved 50 ± 1°C i 30 ± 2 minutter. 0,1 ml udsås på overfladen af GVPC og MWY agar.

Prøver af biofilm og filtermateriale

  • Svaberpindene udstryges direkte på plader med GVPC og MWY agar.

Fem trin indgår i analysen af filtermateriale

  • 0. Direkte udsæd: 0,1 ml udsås på overfladen af GVPC og MWY agar. Hvis konsistensen tillader det, foretages direkte udsæd fra den ufortyndede prøve ellers fra fortyndet prøve.
  • I. direkte udsæd efter rystebord, II. centrifugering, III. Syrebehandling og IV. Varmebehandling: Foretages som til analyse af vandprøven med den modifikation at der afpipetteres 2 ml fra filtermaterialets vandige del.

Pladerne inkuberes ved 37°C ± 1°C og der aflæses efter 4, 7 og 10 dage.

 

| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste | | Top |



Version 1.0 Marts 2005, © Miljøstyrelsen.