| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |

Undersøgelse af bakterieantal og eftervækstpotentiale i vandværksvand

Bilag A
Beskrivelse af metode til bestemmelse af Assimilerbart Organisk Kulstof (AOC)

Princip: Den pasteuriserede prøve tilsættes en blanding af 2 bakteriekulturer med kendt udbyttekonstant. Antallet af de to bakterier bestemmes over en periode på 14 dage. Det højeste antal, N_max, bestemmes for hver bakterie. Koncentrationen af AOC udregnes ved multiplikation af N_max med de tilsatte bakteriers respektive udbyttekonstant.

Prøvetagning: Der udtages prøver på 400 ml til 600 ml efter forskriften i DS2250.

Prøveforberedelse: Prøven pasteuriseres ved 60 °C i en halv time. Flaskerne opvarmes i varmebad med temperatur på 65 –70 °C. Temperaturen i vandet følges i en separat flaske med samme volumen som prøveflasken. Proppen holdes på plads med film for at undgå at propperne springer af. Når temperaturen er 60 °C overføres flaskerne til varmeskab, der er indstillet til 60 °C ± 1 °C, i en halv time. Herved pasteuriseres også prop og top af flaske. Prøverne stille til afkøling ved stuetemperatur. Efter pasteurisering kan prøven holde sig 1 døgn.

Prøveflasker: Prøverne udtages i syrevaskede glødede (550 °C) 1 l flasker med glasslib. Prøverne inkuberes i de samme flasker som de er udtaget i.

Stamkulturer: Senest 14 dage før analysen tilsættes de anvendte bakterier til en næringsopløsning med 1 mg acetat C/l. Kulturerne opbevares ved 15 °C. Kulturerne tjekkes for renhed før analyse.

Podning: Til tiden 0 podes prøverne med 100 µl af en stamkultur, der indeholder Pseudomonas fluorescens stamme P17, og af en stamkultur der indeholder Spirillum sp. stamme NOX. Det tilstræbes at start koncentrationen ligger mellem 100 og 1000 kim per ml.

Inkubering: Flaskerne inkuberes ved 15 °C ± 1 °C i 15 døgn

Kimtalsbestemmelse: Der udtages prøver til bestemmelse af antal kim umiddelbart efter podning, efter 2, 5, 10 og 15 dage. Det accepteres at prøvetagning rykkes en dag.

Prøveflasken rystes, og der udtages 2 gange 1 ml med steril engangs 1 ml pipette i phosfatbuffer, og der laves 10-fold fortyndingsrække. Fra hver fortynding udsås 100 µl på overfladen af hver af 2 LabLemko plader. Pladerne inkuberes ved 21 °C ± 0,5 °C i fire døgn og aflæses i tællekammer. Det accepteres, at pladerne opbevares i op til to døgn i køleskab før tælling.

Beregning: Det gennemsnitlige antal kim beregnes for hver stamme for hver prøvetagningsdag. Der udregnes et kimtal for hver af dobbeltprøverne, som den vægtede middelværdi for alle fortyndinger med < 200 kolonier per plade. N_max for hver stamme beregnes som differencen mellem det maksimale gennemsnitlige kimtal, der er observeret, og kimtallet på dag 0. Herefter multipliceret N_max for hver bakterie med udbyttekonstanten, Y.

Der anvendes de udbyttekonstanter der er bestemt af van der Kooij og Veenendaal (1995). Y_P17 = 4,2 x 10⁶ CFU/µg acetat-C Y_nox = 1,2 x 10⁷ CFU/µg acetat-C