|
| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |
Screeningsundersøgelse for campylobacter i vand
Bilag C
(normativt)
Substrater og reagenser
C.1 Opformeringsbouilloner
C.1.1 Preston Bouillon
Sammensætning:
| Specielt kødekstrakt 1 |
10 g |
| Pepton |
10 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Polymyxin B |
5 000 IU |
| Rifampicin |
10 mg |
| Trimethoprim |
10 mg |
| Amphotericin B |
10 mg |
| Natriumpyruvat |
0,25 g |
| Natriummetabisulphit |
0,25 g |
| Ferrosulfat, FeSO4 ··7H2O |
0,25 g |
| Lyseret blod |
50 ml |
| Vand |
1000 ml |
1 F.eks. Lab-Lemco kødekstrakt (OXOID), som er et handelsnavn. Oplysningen gives til hjælp for brugere af denne standard. Der er ikke tale om nogen anbefaling af produktet.
BEMÆRK Amphotericin B indgår i stedet for cycloheximid
B.1.1.1 Preston grundsubstrat
| Specielt kødekstrakt 1 |
25 g |
| Pepton |
10 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Vand |
940 ml |
1 F.eks. Lab-Lemco kødekstrakt (OXOID), som er et handelsnavn. Oplysningen gives til hjælp for brugere af denne standard. Der er ikke tale om nogen anbefaling af produktet.
Opslem i vand. Fordel som 94 ml portioner i flasker (5.6) med skruelåg. Tag højde for fordampningstab under autoklaveringen.
Sterilisér i autoklave ved (121 ± 3) °C i (15 ± 1) minutter. Åbn autoklaven straks efter den er afkølet til en sikker temperatur (f.eks. 70 °C), og drej lågene til for at undgå optagelse af ilt i substratet.
Efter sterilisering skal pH være 7,4 ± 0,2 ved 25 °C.
Beskyttet mod luft og lys er substratet holdbart i 3 uger ved (5 ± 3) °C.
C.1.1.2 Opløsning af Preston Campylobacter Selektivt Supplement
En opløsning indeholdende pr. ml:
| Polymyxin B |
1250 IU |
| Rifampicin |
2,5 mg |
| Trimethoprim |
2,5 mg |
| Amphotericin B |
2,5 mg |
C.1.1.3 Opløsning af Preston Campylobacter Vækst Supplement
En opløsning indeholdende pr. ml:
| Natriumpyruvat |
0,0625 g |
| Natriummetabisulphit |
0,0625 g |
| Ferrosulfat, FeSO4 ··7H2O |
0,0625 g |
C.1.1.4 Fremstilling af lyseret blod
Brug defibrineret eller citratstabiliseret blod fra okse, får eller hest. Blodet kan opbevares 1 måned ved (5 ± 3) °C, forudsat det ikke viser tegn på ændringer.
Blodet lyseres ved frysning ved (-20 ± 5) °C natten over. Portioner af lyseret blod kan opbevares nogle få dage ved (5 ± 3) °C, forudsat det beskyttes mod iltning.
B.1.1.5 Fremstilling af komplet Preston bouillon
Grundsubstrat og supplementer blandes umiddelbart før podning af bouillonen. Vækstsupplementet (C.1.1.3) og det lyserede blod (C.1.1.4) tilsættes sidst. Efter tilsætning skrues låget tæt til for at undgå
iltning og indholdet blandes forsigtigt.
Preston bouillon fremstilles af følgende ingredienser:
| Preston grundsubstrat (C.1.1.1) |
94 ml |
| Preston Campylobacter Selektivt Supplement (C.1.1.2) |
0,4 ml |
| Campylobacter Vækst Supplement (C.1.1.3) |
0,4 ml |
| Lyseret blod (C.1.1.4) |
5 ml |
C.1.2 Bolton Bouillon
Sammensætning:
| Kødpepton |
10 g |
| Lactalbumin hydrolysat |
5 g |
| Gærekstrakt |
5 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Alfa-ketoglutarsyre |
1 g |
| Natriumpyruvat |
0,5 g |
| Natriummetabisulphit |
0,5 g |
| Natriumcarbonat |
0,6 g |
| Haemin |
10 mg |
| Cefoperazone |
20 mg |
| Vancomycin |
20 mg |
| Trimethoprim |
20 mg |
| Amphotericin B |
10 mg |
| Lyseret blod |
50 ml |
| Vand |
1 000 ml |
BEMÆRK Amphotericin B indgår i stedet for cycloheximid
C.1.2.1 Bolton grundsubstrat
| Kødpepton |
10 g |
| Lactalbumin hydrolysat |
5 g |
| Gærekstrakt |
5 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Alfa-ketoglutarsyre |
1 g |
| Natriumpyruvat |
0,5 g |
| Natriummetabisulphit |
0,5 g |
| Natriumcarbonat |
0,6 g |
| Haemin |
10 mg |
| Vand |
950 ml |
Opløs i vand. Fordel som 95 ml portioner i flasker (5.6) med skruelåg. Tag højde for fordampningstab under autoklaveringen.
Sterilisér i autoklave ved (121 ± 3) °C i (15 1) minutter. Åbn autoklaven straks efter at den er afkølet til en sikker temperatur (f.eks. 70 °C) og drej lågene til for at undgå optagelse af ilt i substratet.
Efter sterilisering skal pH være 7,4 ± 0,2 ved 25 °C.
Beskyttet mod luft og lys er substratet holdbart i 3 uger ved (5 ± 3) °C.
B.2.2.2 Opløsning af Bolton Selektivt Supplement
En opløsning indeholdende pr. ml:
| Cefoperazone |
5 mg |
| Vancomycin |
5 mg |
| Trimethoprim |
5 mg |
| Amphotericin B |
2,5 mg |
C.1.2.3 Fremstilling af brugsklar Bolton bouillon
Grundsubstrat og supplementer blandes umiddelbart før podning af bouillonen. Det lyserede blod (C.1.1.4) tilsættes sidst. Efter tilsætning skrues låget tæt til og indholdet blandes forsigtigt, for at undgå
iltning.
Bolton bouillon fremstilles af følgende ingredienser:
| Bolton grundsubstrat (C1.2.1) |
95 ml |
| Bolton Selektivt Supplement (C.1.2.2) |
0.4 ml |
| Lyseret blod (C.1.1.4) |
5 ml |
C.2 Modified Charcoal Cephoperazone Desoxycholate Agar (mCCDA)
Sammensætning:
| Specielt kødekstrakt 2 |
10 g |
| Pepton |
10 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Bakteriologisk kul |
4 g |
| Casein hydrolysat |
3 g |
| Natriumdesoxycholat |
1 g |
| Ferrosulfat, FeSO4 ··7H2O |
0,25 g |
| Natriumpyruvat |
0,25 g |
| Cefoperazone |
32 mg |
| Amphotericin B |
10 mg |
| Agar |
12 g |
| Vand |
1 000 ml |
2 F.eks. Lab-Lemco kødekstrakt (OXOID), som er et handelsnavn. Oplysningen gives til hjælp for brugere af denne standard. Der er ikke tale om nogen anbefaling af produktet.
BEMÆRK Amphotericin B indgår i stedet for cycloheximid
C.2.1 mCCDA Grundsubstrat
| Specielt kødekstrakt 2 |
10 g |
| Pepton |
10 g |
| Natriumklorid, NaCl |
5 g |
| Bakteriologisk kul |
4 g |
| Casein hydrolysat |
3 g |
| Natriumdesoxycholat |
1 g |
| Ferrosulfat, FeSO4 ·7H2O |
0,25 g |
| Natriumpyruvat |
0,25 g |
| Agar |
12 g |
| Vand |
1 000 ml |
2 F.eks. Lab-Lemco kødekstrakt (OXOID), som er et handelsnavn. Oplysningen gives til hjælp for brugere af denne standard. Der er ikke tale om nogen anbefaling af produktet.
Opslem vand og opvarm til kogning.
Sterilisér i autoklave ved (121 ± 3) °C i (15 ± 1) minutter.
Efter sterilisation skal pH ved 25 °C være 7,4 ± 0,2
Grundsubstratet er holdbart i op til 3 måneder, hvis det opbevares mørkt og beskyttet mod luftens ilt ved (5 ± 3) °C.
C.2.2 mCCDA Selektivt Supplement
En opløsning indeholdende pr. ml:
| Cefoperazone |
8 mg |
| Amphotericin B |
2,5 mg |
C.2.3 Fremstilling af brugsklar mCCDA
Afkøl smeltet mCCDA Grundsubstrat (C.2.1) til (50 ± 5) °C. Tilsæt aseptisk mCCDA selektivt supplement (C.2.2). Bland omhyggeligt og ophæld den brugsklare agar i sterile petri skåle (5.7).
Brug 4 ml mCCDA Selektivt Supplement til 1 000 ml mCCDA Grundsubstrat.
Ophældte mCCDA plader kan i ilttæt indpakning opbevares mørkt i en uge ved (5 ± 3) °C.
Umiddelbart før brug skal pladerne tørre i få minutter for at undgå problemer med kondensvand.
| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste | | Top |
Version 1.0 Marts 2006, © Miljøstyrelsen.
|