Påvisning af patogene bakterier i vand ved anvendelse af DNA-chip-prototype og mikrobiologiske dyrkningsmetoder

1 Formål og valg af modelorganismer

1.1 Baggrund og formål

Baggrunden for denne indledende undersøgelse er, at Bioneer A/S har udviklet en molekylær hurtigmetode baseret på DNA-chip-teknologi til simultan detektion af forskellige patogene mikroorganismer. Denne hurtigmetode gør det i princippet muligt at påvise og samtidig identificere de patogene bakterier, der er relevante i relation til vand. ”Proof-of-concept” for anvendelse af en DNA-chip-prototype til påvisning af patogene bakterier er etableret, og næste skridt er at teste anvendeligheden af et sådant koncept i praksis.

Formålet med dette forprojekt er at undersøge DNA-chip-metodens potentiale og anvendelighed som en hurtig screeningsanalyse for 5 udvalgte patogene mikroorganismer i vandprøver.

Det skal bemærkes, at der til dette forprojekt er anvendt en DNA-chip-prototype, som ikke er færdigudviklet. Den nuværende udgave af DNA-chip-prototypen har begrænsninger mht. specificitet samt indeholder nogle ekstra DNA-kontroller, der har vist sig ikke at fungere optimalt i test-forsøg. Disse begrænsninger har ingen betydning for konklusionerne i dette projekt, og DNA-kontrollerne vil blive korrigeret på næste version af DNA-chippen.

1.2 Valg af mikroorganismer

Mikroorganismerne er valgt med den begrundelse, at de kan være årsag til vandbårne sygdomsudbrud samt at de forekommer i vandmiljøer som drikkevand og i badevand. De nævnte mikroorganismer er Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa, Legionella pneumophila og Salmonella spp..  Mikroorganismerne er opdelt i følgende tre grupper:

  1. Patogene bakterier relevante for drikkevand (Drikkevandsgruppen): Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila og Pseudomonas aeruginosa.
     
  2. Patogene bakterier relevante for varmtvand (Varmtvandsgruppen): Legionella spp.
     
  3. Patogene mikroorganismer relevante for diverse vandmiljøer (Diverse-gruppen): Campylobacter jejuni/coli, Salmonella spp. og Legionella pneumophila, serotype 1.

Legionella er eneste mikroorganisme i gruppe B, og det blev besluttet ikke at analysere gruppe B særskilt, fordi slægten Legionella også indgår i gruppe C.

Til de eksperimentelle analyser i denne undersøgelse er der derfor valgt følgende tre blandinger af bakteriekulturer:

Blanding A): "Drikkevandsgruppen; Campylobacter jejuni + Aeromonas hydrophila + Pseudomonas aeruginosa.
Blanding C): Diverse-gruppen; Campylobacter jejuni + Salmonella spp. + Legionella pneumophila, serotype 1.
Blanding A+C):    Alle.

Det eksperimentelle design i undersøgelsen er beskrevet i afsnit 3.

 



Version 1.0 December 2006, © Miljøstyrelsen.