Påvisning af virus i vand og toskallede bløddyr
1. Sammendrag
Den rutinemæssige mikrobiologiske kvalitetsvurdering af vand og toskallede bløddyr er
i Danmark baseret på forekomst af coliforme bakterier. Påvisning af humane enteriske
virus i vand og toskallede bløddyr udføres ikke rutinemæssigt. Den foreskrevne metode,
der beror på dyrkning af infektiøse virus i cellekulturer, er meget tids- og
arbejdskrævende. I forbindelse med en sundheds- og miljømæssig vurdering af virus
forekomst i vand og toskallede bløddyr samt spredning i vandmiljøer er der behov for
hurtige og pålidelige metoder.
Udvikling af molekylærbiologiske teknikker eksempelvis Polymerase Chain Reaction (PCR)
til påvisning af virus nukleinsyre har medført, at analyseresultater kan foreligge inden
for kort tid. PCR har en høj sensitivitet og specificitet og kan påvise Norwalk virus,
som ikke kan vokse i cellekulturer samt vanskeligt dyrkbare virus som hepatitis A.
Sensitiviteten og specificiteten af PCR kan forøges ved nested PCR, der er en to-trins
PCR reaktion. Vanskeligheder med PCR skyldes hovedsagelig kemiske komponenter i
prøvematerialet, der kan inhibere enzymreaktioner og dermed forringe sensitiviteten. Der
er forsat behov for forskning inden for metoder der effektivt fjerner PCR inhiberende
stoffer.
Virus, der generelt forekommer i meget små mængder i vand, skal opkoncentreres for at
kunne påvises. Den foretrukne metode til koncentrering af virus fra vand er ifølge
American Public Health Association filtermetoden, hvor virus adsorberes til og elueres fra
filtermembraner. Metoden kan opkoncentrere virus fra vand med såvel lavt som højt
indhold af organisk materiale. Efterfølgende rekoncentreres eluater ved organisk
flokkulation eller polyethylen glycol (PEG) præcipitation.
PCR teknikken påviser virus nukleinsyre og dermed ikke nødvendigvis infektiøse
virus. Enterovirus nukleinsyre er omgivet af et kapsid, der beskytter mod det ydre miljø,
og påvist nukleinsyre formodes derfor at være isoleret fra intakte viruspartikler. I de
tilfælde hvor det er ønskeligt at påvise infektiøse virus kan celledyrkning kombineres
med PCR under betingelse af, at de pågældende virus er dyrkbare. De til dato opnåede
resultater indikerer, at der er væsentlige fordele ved PCR og at metoden kan være af
betydning for videre fremskridt inden for teknikker til påvisning af humane enteriske
virus i vand og toskallede bløddyr.
|