Påvisning af virus i vand og toskallede bløddyr

1. Sammendrag

Den rutinemæssige mikrobiologiske kvalitetsvurdering af vand og toskallede bløddyr er i Danmark baseret på forekomst af coliforme bakterier. Påvisning af humane enteriske virus i vand og toskallede bløddyr udføres ikke rutinemæssigt. Den foreskrevne metode, der beror på dyrkning af infektiøse virus i cellekulturer, er meget tids- og arbejdskrævende. I forbindelse med en sundheds- og miljømæssig vurdering af virus forekomst i vand og toskallede bløddyr samt spredning i vandmiljøer er der behov for hurtige og pålidelige metoder.

Udvikling af molekylærbiologiske teknikker eksempelvis Polymerase Chain Reaction (PCR) til påvisning af virus nukleinsyre har medført, at analyseresultater kan foreligge inden for kort tid. PCR har en høj sensitivitet og specificitet og kan påvise Norwalk virus, som ikke kan vokse i cellekulturer samt vanskeligt dyrkbare virus som hepatitis A. Sensitiviteten og specificiteten af PCR kan forøges ved nested PCR, der er en to-trins PCR reaktion. Vanskeligheder med PCR skyldes hovedsagelig kemiske komponenter i prøvematerialet, der kan inhibere enzymreaktioner og dermed forringe sensitiviteten. Der er forsat behov for forskning inden for metoder der effektivt fjerner PCR inhiberende stoffer.

Virus, der generelt forekommer i meget små mængder i vand, skal opkoncentreres for at kunne påvises. Den foretrukne metode til koncentrering af virus fra vand er ifølge American Public Health Association filtermetoden, hvor virus adsorberes til og elueres fra filtermembraner. Metoden kan opkoncentrere virus fra vand med såvel lavt som højt indhold af organisk materiale. Efterfølgende rekoncentreres eluater ved organisk flokkulation eller polyethylen glycol (PEG) præcipitation.

PCR teknikken påviser virus nukleinsyre og dermed ikke nødvendigvis infektiøse virus. Enterovirus nukleinsyre er omgivet af et kapsid, der beskytter mod det ydre miljø, og påvist nukleinsyre formodes derfor at være isoleret fra intakte viruspartikler. I de tilfælde hvor det er ønskeligt at påvise infektiøse virus kan celledyrkning kombineres med PCR under betingelse af, at de pågældende virus er dyrkbare. De til dato opnåede resultater indikerer, at der er væsentlige fordele ved PCR og at metoden kan være af betydning for videre fremskridt inden for teknikker til påvisning af humane enteriske virus i vand og toskallede bløddyr.