| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste |

Bacillus thuringiensis og fødevareforgiftninger

3 Resultater

• 3.1 Normalmateriale.
• 3.2 Patient prøver

3.1 Normalmateriale.

Det fremgår af tabel 2, at prøver fra i alt 420 personer blev undersøgt. Fra 81 af disse personer blev der isoleret B. cereus lignende kolonier, men kun hos tyve af disse personer kunne identifikationen verificeres ved hjælp af mikroskopi. Denne identifikation kunne også verificeres ved hjælp af PCR. Hos fire af de tyve personer kunne der findes isolater der producerede d-endotoksin krystaller, og som derfor må kaldes B. thuringiensis. Fra tre personer producerede isolaterne bipyramidale krystaller, hos den fjerde runde. Isolater med bipyramidale krystaller er ofte aktive overfor sommerfuglelarver, og denne krystalform dannes da også af stammer af serotypen B. thuringiensis kurstaki. Runde krystaller har derimod ofte en ukendt aktivitet.

De tyve personer fordelte sig som 7 børn på mellem 1 og 5 år, tre piger og fire drenge, og 13 voksne mellem 30 og 83 år (gennemsnit 55 år), 7 kvinder og 6 mænd. Prøverne er indsamlet i ni af årets måneder, der er ingen prøver fra januar, september og december: Der er flest prøver fra februar og marts, nemlig 4.

Tabel 2 Oversigt over antallet af personer hos hvem der blev fundet B. cereus lignende bakterier ved koloni-morfologi, mikroskopi og PCR. Desuden er antallet af personer hos hvem der er fundet B. thuringiensis angivet.

I tabel 3 kan det ses hvorledes og på hvilket medie B. cereus er blevet isoleret. Hos 14 af personerne er bakterierne isoleret efter berigelse i oksebouillon, i 12 tilfælde på såvel MYP som T3, i to tilfælde kun på T3. Fra saltvand er de alle seks isoleret på T3-plader efter varmebehandling, altså som sporer, en enkelt blev også isoleret på MYP. Der blev i ingen tilfælde isoleret bakterier fra såvel saltvand som oksebouillon. Der blev ikke fundet bakterier på T3 plader uden en forudgående varmebehandling.

Tabel 3 Oversigt over hvorledes bakterierne er isoleret fra personernes fæces. (opgjort pr. person)

Af tabel 4 kan det ses, hvor mange isolater der blev isoleret af de forskellige kategorier. Fra de 81 personer med Bc-lignende kolonier blev der isoleret 322 isolater; 84 af disse isolater lignede også B. cereus ved mikroskopi, hvilket for 83 vedkommende kunne verificeres ved PCR-analyse. 26 isolater kan henføres til B. thuringiensis ved tilstedeværelsen af krystaller.

Tabel 4  Antal isolater inddelt i fire forskellige kategorier.

Af tabel 5 fremgår det, at blandt de 26 B. thuringiensis isolater, er der 13 som besidder såvel Cry1 som Cry2 gener. Ingen af isolaterne besidder nogle af de øvrige cry-gener, der er undersøgt for. Det betyder, at 13 isolater der producerer krystaller ikke kan beskrives nærmere ved hjælp af de anvendte PCR-analyser. Disse 13 isolater er alle fra den samme person. Ingen af disse cry gener blevet fundet hos B. cereus isolaterne. Da ingen af isolaterne besidder et flagellin gen som detekteres med de anvendte primere, er det ikke sandsynligt, at isolaterne er identiske med B. thuringiensis kurstaki HD1.

Tabel 5 Karakterisering af B. thuringiensis isolaterne ved PCR-analyse.

Af tabel 6 fremgår det, at der blev fundet tre personer med B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal. Isolaterne er identiske med hensyn til RAPD-profiler hos de to personer, mens der er fundet to forskellige isolater hos den tredje person. Hos de tre personer er der i alt blevet fundet B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal med tre forskellige RAPD profiler. Profilen hos de 8 isolater fra M36705 er identisk med profilen for B. thuringiensis HD1, men da disse isolater ikke besidder et flagellin gen (Tabel 5), er det ikke sandsynligt at disse isolater er identiske med HD1. Derimod er det sandsynligt, at de kan henføres til serotypen B. thuringiensis aizawai. (Hendriksen og Hansen, 2006). De to prøver er indsamlet i februar og den tredje i november, de stammer fra en dreng, en voksen kvinde og en voksen mand.

Tabel 6 Karakterisering af B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal ved RAPD-analyse.

3.2 Patient prøver

Det fremgår af tabel 7, at prøver fra i alt 343 patient-prøver blev undersøgt. Fra 120 af disse prøver blev der isoleret B. cereus lignende kolonier, men kun hos 64 af disse prøver kunne identifikationen verificeres ved hjælp af mikroskopi. Denne identifikation kunne verificeres ved hjælp af PCR i 35 af prøverne. Disse prøver stammer fra 34 patienter, idet to af prøverne er fra den samme patient, men fra to forskellige dage. I otte af de 35 prøver kunne der findes isolater, der producerede d-endotoksin krystaller, og som derfor må kaldes B. thuringiensis. I alle de otte prøver producerede isolaterne bipyramidale krystaller. Disse prøver stammer fra otte forskellige patienter

Tabel 7 Antal prøver hvori der blev fundet B. cereus lignende bakterier ved koloni-morfologi, mikroskopi og PCR. Desuden er antallet af i prøver i hvilke der er fundet B. thuringiensis angivet.

I tabel 8 kan det ses, hvorledes og på hvilket medie de B. cereus lignende kolonier er blevet isoleret. I 14 af prøverne er bakterierne isoleret efter berigelse i oksebouillon, de 12 på såvel MYP som på T3 og to kun på T3. Fra saltvand er der blevet isoleret 24 primært på T3-plader efter varmebehandling, altså som sporer, to blev også isoleret på MYP. I fem prøver blev der isoleret fra såvel saltvand som oksebouillon. Antallet af CFU blev opgjort på T3-plader efter varmebehandling. Koncentrationen var mellem 50 og 1000 cfu/g hos 20 patienter, mellem 1000 og 10.000 cfu/g hos 2 patienter, mellem 10.000 og 100.000 hos en patient og mellem 100.000 og 1.000.000 hos en anden patient.

Tabel 8 Oversigt over hvorledes bakterierne er isoleret fra prøverne

Af tabel 9 kan det ses, hvor mange isolater der blev isoleret med basis i deres kolonimorfologi, hvor mange af disse som også var Bc-lignende ved mikroskopi, hvor mange af disse der kunne verificeres vha PCR og endelig hvor mange der havde krystaller. Fra de 120 prøver med Bc-lignende kolonier blev der isoleret 501 bakterier; 238 af disse isolater lignede også B. cereus ved mikroskopi, hvilket for 154 isolater kunne verificeres ved PCR-analyse. 16 isolater kan henføres til B. thuringiensis ved tilstedeværelse af krystaller. Disse 16 isolater stammer fra 8 patienter, hos ingen af disse patienter oversteg koncentrationen 1000 cfu/g.

Tabel 9 Antal bakterier isoleret som Bc-lignede med basis i kolonimorfologi, antal af disse som var Bc-lignende ved mikroskopi, antal hvor identifikationen kunne verificeres vha PCR og antal isolater der producerer krystaller.

Tabel 10 giver en oversigt over de patienter som er blevet fundet positive for B. cereus/B. thuringiensis. Desuden kan man se hvorfor prøven er blevet indsendt (symptomer), og hvorvidt der er blevet identificeret andre bakterier fra patienten. Det kan ses at aldersspredningen blandt patienterne er stor (fra 0 til 83 år); seks er under 10 år og fire er over 65. Der 20 kvinder og 14 mænd. Da alle prøverne stammer fra patienter må det skyldes, at de har en eller anden form for symptomer fra tarmsystemet. Det er oplyst, at 8 har diarre, 1 intermitterende diare, og tre er syge. For de øvrige foreligger der ikke symptomer. Hos to patienter er der udover B. cereus fundet E. coli VTEC, hos en Clostridium difficile, og hos en Salmonella enterica.  B. thuringiensis er fundet hos 4 mænd og 4 kvinder mellem 16 og 84 år. Patienten med det høje antal B. cereus er H45900, en et-årig pige, hvor bakterierne blev identificeret i prøver fra to forskellige dage. Prøverne blev indsendt til SSI for at få undersøgt for forekomst af E.coli VTEC (som dog ikke blev identificeret i prøverne).

Tabel 10 Oversigt over patienter med B. cereus/B. thuringiensis.

Det fremgår af tabel 11, at der var 17 isolater som var positive for cry1. Det betyder, at der er et isolat som ikke dannede krystaller, selvom det besidder genet, idet (tabel 9) der kun var 16 isolater der dannede krystaller.

Af tabel 10 fremgår det endvidere, at blandt de nu 17 isolater der besidder cry-gener (B. thuringiensis isolater), så er der 17 som besidder såvel cry1 som cry2 gener, og 12 som også besidder flagellin genet. Ingen af isolaterne besidder nogle af de øvrige cry gener, der er undersøgt for.

Tabel 11 Karakterisering af B. thuringiensis isolaterne ved PCR-analyse.

Af tabel 12 fremgår det, at blandt de otte personer med B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal, så er isolaterne identiske med hensyn til RAPD-profiler hos de 5 personer, mens der er fundet to forskellige profiler hos to personer og tre forskellige hos en. Hos de otte personer er der i alt blevet fundet 17 B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal med i alt ti forskellige profiler. Profilen hos de 4 af isolaterne fra 4 patienter er identisk med profilen for B. thuringiensis HD1. Disse 4 isolater er også positive med hensyn til cry1 og cry2 samt flagellin genet, så det er meget sandsynligt at disse isolater er identiske med B. thuringiensis kurstaki HD1.

Tabel 12 Karakterisering af B. thuringiensis isolater med bipyramidal krystal ved RAPD-analyse.

| Forside | | Indhold | | Forrige | | Næste | | Top |

Version 1.0 Januar 2008, © Miljøstyrelsen.